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Die Rolle des herz- und skelettmuskelspezifischen Transkriptionsfaktors skNAC bei der Muskeldifferenzierung und bei entzündlichen Kardiomyopathien (2014)

Art

Hochschulschrift

Autor

Breustedt, Theresia (WE 3)

Quelle

Berlin: Mensch und Buch Verlag, 2014 — 119 Seiten

ISBN: 978-3-86387-544-2

Verweise

URL (Volltext): https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/215

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Abstract / Zusammenfassung

skNAC ist ein herz-sowie skelettmuskelspezifisches Protein, über dessen Funktion noch wenig bekannt ist. Es gibt Hinweise darauf, dass skNAC während der frühen Myogenese als transkriptioneller Kofaktor die Expression verschiedener Gene moduliert. Während späterer Phasen der Muskeldifferenzierung könnte das Protein als eine Art molekulares Chaperon zytoplasmatische Prozesse, insbesondere Myofibrillogenese und Sarkomerogenese, regulieren. Frühere Arbeiten unserer Arbeitsgruppe konnten zudem nachweisen, dass es bei der Skelettmuskelregeneration sowie bei entzündlichen Skelettmuskelerkrankungen zu einer dramatischen Induktion der skNAC-Expression kommt. Zur skNAC-Genexpression im adulten Nager-Herzen lagen jedoch vor Beginn dieser Arbeit keine Daten vor. Im Rahmen dieser Arbeit sollte daher zunächst das räumliche Expressionsmuster von skNAC in mit Coxsackievirus-B3 (CVB-3)-infizierten Herzen untersucht werden. Coxsackieviren lösen eine Myokarditis im betroffenen Herzen aus. Hierfür wurden Paraffinschnitte von Herzen zweier, für eine CVB-3-induzierte Kardiomyopathie unterschiedlich suszeptible Mäusestämme immunhistochemisch mithilfe eines skNAC-Antiserums untersucht. Jedoch ließen sich mit dem verwendeten Antiserum keine spezifischen Unterschiede bezüglich des Färbemusters zwischen dem Stamm A.BY/SnJ (ABY), welcher nicht in der Lage ist, das Virus zu eliminieren, und dem Stamm C57BL/6 (BL6), welcher das Virus eliminieren kann und i.d.R. keine Kardiomyopathie entwickelt, nachweisen. Im zweiten, skelettmuskelspezifischen Teil der Arbeit sollte dann anhand eines definierten Zellkulturmodells die Funktion von skNAC während der Skelettmuskeldifferenzierung genauer analysiert werden. Dazu untersuchten wir zunächst die Auswirkungen einer Hemmung der skNAC-Expression in C2C12-Skelettmuskelzellen. Hierfür wurde eine Transfektion von C2C12-Zellen mittels einer skNAC-spezifischen siRNA durchgeführt. Anschließend wurden die Zelllysate auf die Expression verschiedener myogener Differenzierungsmarker sowohl auf RNA- als auch auf Proteinebene mittels Northern Blot und Western Blot-Analyse hin untersucht. Hierbei ergab sich zusammenfassend, dass eine Hemmung der skNAC-Expression keinen Einfluss auf die Expression von Myogenin, Desmin, p21, Caveolin-3, Entactin-1 sowie α-Actinin hat. Die Expression von MyHC erschien weder auf RNA- noch auf Proteinebene vermindert, bei einigen Experimenten war auch eine leichte Induktion der Expression auf Proteinebene sichtbar. Hierfür verantwortlich könnten posttranskriptionelle Mechanismen sein. Zudem ergab sich, dass die Morphologie der transfizierten Zellen zwar normal erschien, jedoch erschien die MyHC-Färbung im Vergleich zu den Kontrollen diffus. Dies lässt sich möglicherweise dadurch erklären, dass die Prozesse der Myofibrillogenese / Sarkomerogenese durch eine Hemmung der skNAC-Expression gestört wurden. Da vor Beginn dieser Arbeit noch kein Herzmuskelzellsystem etabliert war, an welchem Untersuchungen zur skNAC-Genexpression und zur Funktion des entsprechenden Protein in Kardiomyozyten durchgeführt werden konnten, wurde geprüft, ob sich die Zelllinie H9c2 dafür eignen könnte. Diese wurde mittels Northern Blot- Analyse auf eine mögliche Expression von skNAC hin untersucht mit dem Ergebnis, dass diese Zelllinie tatsächlich skNAC exprimiert. Sie könnte somit für weitergehende Untersuchungen eingesetzt werden.